RNA實驗所用到的DEPC水滅菌原因?? - 社會議題
By Carolina Franco
at 2008-05-08T00:00
at 2008-05-08T00:00
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請問在做RNA方面的實驗所用到的DEPC水
DEPC是RNase的抑制劑..當與ddH2O混和後拿去滅菌...
滅完菌後其失去了RNase的抑制作用....那...
為什麼要拿去滅菌...其原因為和??
DEPC是RNase的抑制劑..當與ddH2O混和後拿去滅菌...
滅完菌後其失去了RNase的抑制作用....那...
為什麼要拿去滅菌...其原因為和??
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社會議題
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By Hedda
at 2008-05-09T09:54
at 2008-05-09T09:54
DEPC抑制RNase的方式：
DEPC(焦碳酸二乙酯 diethyl pyrocarbonate)藉由通過和RNase的活性中心(active site)中histidine(組氨酸)的imidazole ring(咪唑環)結合使RNase蛋白變性，進而抑制降解RNA的活性。
下面的圖片連結有詳細機制(diethyl pyrocarbonate就是DEPC)，看左半部的圖即可：
http://www.scielo.br/img/revistas/bjmbr/v38n6/5676...
回到您的問題，DEPC處理過的水要通常用來進一步做RNA相關的實驗，有些實驗則需要加入酵素反應，此時若DEPC未經滅菌方式使其失去活性，我們所加入的酵素有可能會因DEPC對於imidazole ring的結合而失去其活性，影響後續實驗的進行。
另外一點，當在用DEPC處理ddH2O過程中，從盛裝ddH2O到加入DEPC水的過程，難免容器、空氣中都會有細菌存在，所以基本上做這些實驗滅菌是必要的。
因此，我額外一提，滅完菌的DEPC-ddH2O，必須小心使用，做RNA實驗的都知道，實驗衣、手套、口罩甚至浴帽等都很重要，因為大自然中處處都是RNase，幫括我們人身上皮膚、唾液等都會產生RNase，藉著穿這些衣物以防止RNase的污染，所以DEPC-ddH2O的保存與使用最好都要在RNase-free的環境下。
2008-05-09 18:12:51 補充：
維基百科介紹的imidazole ring(咪唑環)：
http://zh.wikipedia.org/wiki/%E5%92%AA%E5%94%91
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